胃癌醫學(xué)檢驗論文
1材料與方法
1.1研究對象
186例非賁門(mén)胃癌患者，來(lái)自中山大學(xué)附屬醫院住院及門(mén)診患者，經(jīng)臨床、胃鏡及病理診斷證實(shí)。男81例，女105例，平均發(fā)病年齡（55.19±14.05）歲。隨機選取298例來(lái)自武漢大學(xué)中南醫院的健康體檢者，其中男198例，女100例，平均年齡（39.20±14.12）歲。以上個(gè)體均為無(wú)血緣關(guān)系的廣東漢族人，既往無(wú)糖尿病、系統性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節炎、炎癥性腸病等自身免疫性疾病史。
1.2研究方法
1.2.1Hp的檢測
采用ELISA檢測Hp感染。
1.2.2基因組DNA提取
抽取靜脈血4ml，常規酚/氯仿抽提基因組DNA。
1.2.3PCR擴增與限制性片段長(cháng)度多態(tài)性分析(PCR睷FLP)
1.2.3.1TLR4Asp299Gly，Thr399Ile基因多態(tài)性檢測
將PCR產(chǎn)物用限制性?xún)惹忻该盖泻笠?%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離、GV1染色。
1.2.3.2CD14C159T基因多態(tài)性檢測
引物設計及反應條件參照文獻，引物為F：5′TGCCAGGAGACACAGAACCC3′，R：5′TGTCATTCAGTTCCCTCCTC3′，PCR產(chǎn)物用限制性?xún)惹忻该盖泻笠?%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離、GV1染色。
1.2.4統計學(xué)分析
病例組和對照組人群Hardy瞁einberg平衡采用2擬和優(yōu)度檢驗，等位基因及基因型頻率采用直接計數法計算，2檢驗差異的顯著(zhù)性水平（檢驗水準為α=0.05），相對風(fēng)險度用OR（Oddsratio）值及95%可信區間（95%CI）來(lái)評價(jià)。
2結果與討論
我們的研究中，正常人的Hp感染率是61.3%，通過(guò)對湖北漢族人群Hp感染的檢測，發(fā)現非賁門(mén)胃癌組Hp感染率顯著(zhù)高于對照組（P<0.0001，OR=7.573，95%CI：3.585～15.995）。Correa等認為，胃黏膜在有害因素作用下產(chǎn)生損傷，黏膜細胞再分裂、增生以修復損傷的過(guò)程中可啟動(dòng)細胞凋亡，以清除無(wú)法修復的具有遺傳缺陷的細胞，但有些胃黏膜細胞可因某種原因逃避凋亡，細胞壽命得以延長(cháng)，增加其進(jìn)一步受損的機會(huì )，胃黏膜經(jīng)腸化、異型增生逐漸向惡性細胞轉化。雖然Hp具體致癌機制至今仍未清楚，但Correa提出的以炎癥為觸發(fā)因素的胃癌發(fā)生機制理論受到人們的重視，也肯定了炎癥在Hp胃癌的發(fā)生中的作用�；铙w內，胃上皮細胞可以表達TLR，故很有可能TLRs表達于胃上皮細胞并與Hp相互作用，從而調節致炎細胞因子和趨化因子的生成，引起胃黏膜的炎癥。進(jìn)而在Hp感染性活動(dòng)性胃炎的背景下，通過(guò)胃上皮的前期病損、腸化生和不典型增生逐漸發(fā)展，導致了胃癌的形成。TLR4/CD14基因突變可使機體的免疫系統失去正常處理胃腔HpLPS等病原分子的能力，進(jìn)而使胃黏膜在其長(cháng)期刺激下產(chǎn)生感染、炎癥乃至癌變。TLR4基因突變可導致對LPS無(wú)反應，或LPS信號途徑的抑制。野生型TLR4的表達增強可使LPS信號傳導增強。
通過(guò)對TLR4基因Asp299Gly和Thr399Ile多態(tài)性的檢測，未發(fā)現其896bp處A→G和1196bp處C→T的突變，提示此2個(gè)等位基因突變在中國湖北漢族人群中少見(jiàn)，說(shuō)明TLR4基因不是胃癌的易感基因。就此我們對中國漢族人與日本人及德國人的TLR4Asp299Gly和Thr399Ile基因多態(tài)性分布進(jìn)行了比較，中國漢族人與日本人的分布頻率及基因型頻率的分布無(wú)明顯差異性，均未檢測到突變體，但與德國人（9%）的突變頻率存在顯著(zhù)差異性（P<0.0001）。歐洲人和亞洲人在該位點(diǎn)等位基因頻率和基因型頻率分布的不同，將有助于闡明不同種族和不同地區人群在疾病發(fā)生機制上的差異。CD14基因位于5號染色體長(cháng)臂（5q2331），CD14啟動(dòng)子區-159位點(diǎn)存在單個(gè)堿基的替換，該等位基因位于Sp1轉錄因子結合位點(diǎn)附近，主要影響CD14的表達，且TT純合子患者單核細胞表面CD14的表達密度。有研究認為在-159位點(diǎn)的T/C的突變可能導致CD14啟動(dòng)子的活化增強，促進(jìn)CD14基因的轉錄，使單核細胞高表達CD14，且CD14可以調節LPS誘導的IL1及TNFα的分泌，從而使炎癥應答增強。因此，CD14159基因多態(tài)性可能是導致個(gè)體在對Hp感染的免疫應答中不同的CD14表達水平及免疫應答程度的基因方面的因素。為此我們對該位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行了檢測，發(fā)現TT基因型在非賁門(mén)胃癌患者中（45.35%）高于正常人群（29.2%），二者存在顯著(zhù)差異，T等位基因亦顯著(zhù)高于對照組(P=0.0078)。當我們按照Hp的感染情況分組后，我們發(fā)現非賁門(mén)胃癌Hp+組TT基因型亦高于對照組Hp+組。我們的結果表明CD14159位點(diǎn)TT純合子或者T等位基因可能是Hp+非賁門(mén)胃癌的易感基因。此外，CD14附近以及與CD14連鎖的其他基因多態(tài)性也可能影響疾病的表型與預后，因此，對CD14鄰近的基因也需做進(jìn)一步的研究。
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