艾滋病抗體檢測醫學(xué)科技論文
1.材料及方法
1.1材料
高質(zhì)量的質(zhì)控物：為保證質(zhì)控物的良好質(zhì)量，首先，質(zhì)控物要求在220℃的環(huán)境下保存；其次避免反復凍融。購于衛生部臨檢中心。ELISA檢測抗HIV試劑盒：北京萬(wàn)泰HIV（1+2型）ELISA抗體診斷試劑盒。96孔洗板機(芬蘭丹尼公司)；MK-2型酶標儀(芬蘭丹尼公司)；移液器等。
1.2方法
有關(guān)質(zhì)控血清的制備，應在無(wú)菌條件下用含有10%小牛血清PBS緩沖液將陽(yáng)性對照血清稀釋成低值弱陽(yáng)性,然后將稀釋后的血清以每管0.5ml進(jìn)行分裝,并將其置20℃環(huán)境下保存備用。為實(shí)現對質(zhì)控血清的精密性檢測，在檢測樣品的同時(shí)，還應對抗-HIV質(zhì)控血清進(jìn)行檢測，將同時(shí)檢測到的數據進(jìn)行比較，以比較其精密性。洗板：洗板所用的洗液先用蒸餾水進(jìn)行適當的配置以保證其PH值正常。要求浸泡時(shí)間多余45s，洗板后殘液不得超過(guò)2μl，也即人工扣板墊紙不濕。稀釋方法：由于抗體檢測實(shí)驗所加樣品僅需10μl，少加或者多加都會(huì )造成不同程度的誤差，而影響到抗體檢測的質(zhì)量。由此，移取精準的樣品的移液器在獲取樣品量方面十分重要。因此，應確保以下幾點(diǎn)：一保證移液器和移液頭間連接的嚴密性；二取樣時(shí)為避免移液器粘帶血清，應保證移液頭恰與液面接觸；三為避免對灰帶區的誤判，在稀釋樣品液時(shí)不能使用滴瓶，而采用移液器進(jìn)行樣品的滴加，以保證抗體檢測質(zhì)量的穩定�；谝陨弦c(diǎn)，在板中加入100μl稀釋液再加10μl標本,同時(shí)吹吸3次混勻。顯色：ELISA反應中最佳的色原底物是TMB。但在加入終止液15min后濃度過(guò)高的就會(huì )產(chǎn)生灰褐色絮狀沉淀。因此，處理嚴格按照使用說(shuō)明書(shū)來(lái)控制顯色的溫度、時(shí)間等外在因素，以避免人為因素所造成的吸光度等的升降外，還應在加入終止液的15min內及時(shí)進(jìn)行比色。
2.結果
2.1穩定性試驗
使用制備的質(zhì)控品對艾滋病抗體每隔一個(gè)月進(jìn)行檢測。當S/CO波動(dòng)范圍未超出質(zhì)控范圍，也即實(shí)驗的穩定性檢測屬真。
2.2制作質(zhì)控圖
在使用ELISA質(zhì)量控制方法來(lái)控制艾滋病抗體檢測實(shí)驗室質(zhì)量時(shí)，為保證在實(shí)際中獲得良好的效果，首先應做好OCV及RCVK來(lái)確定失控的標準，然后利用Westgard規則判定失控，使用生化L2J圖進(jìn)行。由于采用ELISA方法進(jìn)行實(shí)驗室質(zhì)量控制的目的在于檢測艾滋病抗體，故而，應確保這一方法的敏感性�？刹捎迷S斌提出的臨界值血清界定法，試劑所設陰陽(yáng)對照為內對照,另設臨界值、高值陽(yáng)性和2份正常人陰性對照,作為外對照與標本同時(shí)檢測,臨界值S/CO>1,高值陽(yáng)性S/CO>10,正常人陰性對照A值在01050～01100，當其中所存在的各項中有一項不符合標準即為失控。臨界值為敏感度監控、陰性對照為特異性監控、高值為“HOOK”監控，由此可見(jiàn)，臨界值血清界定既反映ELISA的靈敏度又兼顧特異性。
3.討論
ELISA方法檢測HIV的實(shí)驗室質(zhì)量控制，可用吸光度值來(lái)表示，還可以使用S/CO值來(lái)表示。當前，艾滋病抗體檢測一般使用ELISA法，這一方法具有靈敏度較高的特點(diǎn)，非常適于當前眾多血站系統對HCV、抗2HIVHBsAg等的檢測。本人依據多年的指控監測工作經(jīng)驗認為，在使用較強陽(yáng)性的質(zhì)控物進(jìn)行作圖時(shí)，以上兩種方法都會(huì )產(chǎn)生較好的實(shí)驗效果；但是，對于一些中性、弱陽(yáng)性的質(zhì)控物進(jìn)行作圖時(shí)，S/CO值的表示方法更為科學(xué)、準確。但是在實(shí)際的實(shí)驗室檢測中，也存在著(zhù)眾多影響這一方法有效運用的不利因素，因此，加強艾滋病抗體檢測的實(shí)驗室質(zhì)量控制具有現實(shí)性的意義。
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