不同白英藥材中總皂苷含量差異探究論文
白英為茄科植物Solanum lyratum Thunb.的干燥全草，性微寒，味苦。最早見(jiàn)于《本經(jīng)》記載，列為上品，為傳統中藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、除濕等功效，用于治療癌癥腫瘤、皰疹、瘧疾、黃疸、水腫、淋病、風(fēng)濕性關(guān)節炎、白帶異常等病證。
不同白英藥材中總皂苷含量差異探究論文
【摘要】 目的建立白英中總皂苷的含量測定方法。
方法選用薯蕷皂苷元為對照品，采用分光光度法，高氯酸顯色，在410 nm處測定吸光度，計算白英中總皂苷含量。
結果薯蕷皂苷元的質(zhì)量濃度在8.91～29.70μg/ml范圍內與吸光度值呈良好線(xiàn)性關(guān)系(r=0.999 2)，方法的平均回收率為95.9%(n=9)，RSD為1.5%;不同來(lái)源的白英藥材中總皂苷含量有較大差異。
結論該方法操作簡(jiǎn)便、準確、靈敏、重現性好，可用于白英藥材的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】 白英 總皂苷 薯蕷皂苷元 分光光度法
白英為茄科植物Solanum lyratum Thunb.的干燥全草，性微寒，味苦。
最早見(jiàn)于《本經(jīng)》記載，列為上品，為傳統中藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、除濕等功效，用于治療癌癥腫瘤、皰疹、瘧疾、黃疸、水腫、淋病、風(fēng)濕性關(guān)節炎、白帶異常等病證。
白英含有多種化學(xué)成分，主要有甾體皂苷類(lèi)、甾體生物堿類(lèi)、有機酸類(lèi)等化合物，其中皂苷類(lèi)成分主要包括以薯蕷皂苷元、替高皂苷元、雅姆皂苷元等皂苷元為非糖部分的多種甾體皂苷。
藥理研究顯示白英中總皂苷體內外具有一定的抗腫瘤作用，且存在一定的選擇性。
因此，測定白英中總皂苷的含量對評價(jià)白英藥材質(zhì)量具有重要意義。
總皂苷的測定方法有重量法，UV，TLCS，HPLC，GC-MS法。
目前有關(guān)白英中總皂苷的含量測定尚未見(jiàn)報道，本文建立了用UV測定白英中總皂苷含量的方法，并比較了24種不同來(lái)源的白英中總皂苷的含量，為白英的質(zhì)量控制提供一定的依據。
一、儀器與材料
紫外分光光度計(上海棱光技術(shù)有限公司)、旋轉蒸發(fā)器 (RE-52AA，上海亞榮儀器廠(chǎng))、水浴鍋(鞏義市杜甫儀器廠(chǎng))。
薯蕷皂苷元標準品(中國藥品生物制品檢定所提供，I539-200001，含量測定用)，無(wú)水乙醇(AR，天津百盛化工有限公司)，甲醇(AR，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司)，三氯甲烷(AR，沈陽(yáng)經(jīng)濟技術(shù)開(kāi)發(fā)區試劑廠(chǎng))，鹽酸(AR，天津市大茂化學(xué)試劑廠(chǎng))，高氯酸(AR，天津市東方化工廠(chǎng))。
24種不同來(lái)源的白英藥材均由沈陽(yáng)藥科大學(xué)孫啟時(shí)教授鑒定為茄科植物Solanum lyratum Thunb. 的干燥全草。
二、方法與結果
2.1 對照品溶液的制備精密稱(chēng)定薯蕷皂苷元對照品約3 mg，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容即得。
2.2 樣品溶液的制備精密稱(chēng)定1.0 g白英藥材，置索氏提取器內，加60 ml三氯甲烷脫脂2 h后，揮去三氯甲烷溶劑;用200 ml 80%乙醇在80℃下提取至無(wú)色，
將乙醇液旋轉蒸發(fā)至干;殘渣加2.5 mol·L-1鹽酸50 ml加熱回流3 h，過(guò)濾;冷卻后用三氯甲烷分3次(30，20，20 ml)回流萃取，15 min/次;合并三氯甲烷萃取液,水洗至中性，水洗液再加入20 ml三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷萃取液，水浴蒸干溶劑,殘渣用甲醇溶解并定容至10.0ml即得。
2.3 吸收光譜的測定分別精密量取薯蕷皂苷元對照品溶液與樣品溶液1.0 ml，置水浴中揮干溶劑，精密加入10.0 ml高氯酸，搖勻。
65℃水浴加熱15 min，取出立即置于冰水浴中15 min后，以空白作參比，在200～600 nm波長(cháng)范圍內繪制吸收曲線(xiàn)，薯蕷皂苷元在405 nm處有最大吸收，樣品溶液在405～412 nm處有較強吸收，故選擇410 nm作為測定波長(cháng)。
2.4 標準曲線(xiàn)的制備精密吸取對照品溶液0.3，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，分別置于三角瓶中，揮干溶劑，精密加入10.0 ml高氯酸，搖勻。
65℃水浴加熱顯色15 min，取出后立即置于冰水浴中15 min后停止反應，以空白作參比，在410 nm處測定吸光度值。
計算得回歸方程為A=0.027 6C+0.005 5，r=0.999 2，結果表明薯蕷皂苷元在8.91～29.70 μg/ml范圍內與吸光度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。
2.5 正交實(shí)驗法對制備樣品溶液的優(yōu)選本實(shí)驗選定鹽酸濃度(mol/L)、乙醇體積分數(%)、水解時(shí)間(h)作為考察因素，每個(gè)因素各取3個(gè)水平，以總皂苷含量為評價(jià)指標，應用L9(34)正交表安排實(shí)驗。
因素水平表見(jiàn)表1，正交實(shí)驗結果見(jiàn)表2。
通過(guò)直觀(guān)分析表明：影響因素的主次順序為水解時(shí)間>鹽酸濃度>乙醇體積分數，經(jīng)過(guò)分析，選擇優(yōu)化條件為：水解時(shí)間3 h，鹽酸濃度2.5 mol/L，乙醇體積分數80%。
2.6 穩定性實(shí)驗準確吸取樣品溶液1.0 ml，按“吸收光譜的測定”項下顯色，于410 nm波長(cháng)處每隔10 min測定其吸光度，結果表明樣品溶液的RSD為0.4%，樣品溶液顯色后在60 min內穩定性良好。
2.7 精密度實(shí)驗精密吸取對照品溶液1.0 ml，共5份，按“吸收光譜的測定”項下顯色，410 nm波長(cháng)處測定，RSD為0.8%。
實(shí)驗結果表明，方法的精密度良好。
2.8 重復性實(shí)驗取樣品5份，按樣品溶液的制備法和顯色法，依法測定，計算樣品中總皂苷含量。
平均總皂苷含量2.12 mg·g-1，RSD=1.4%(n=5)，表明方法的重復性良好。
2.9 回收率實(shí)驗準確稱(chēng)取一定量已知總皂苷含量的白英樣品，每份0.5 g，加入一定量的薯蕷皂苷元對照品，按樣品溶液的制備和測定步驟進(jìn)行，計算得回收率。
2.10 樣品的測定準確吸取樣品溶液1.0 ml，按“吸收光譜的測定”項下進(jìn)行測定。
分別測定了24種不同來(lái)源的白英藥材中總皂苷的含量。
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從上表中可以得出：不同來(lái)源的白英中總皂苷含量不同，產(chǎn)于江蘇與昆明的白英中總皂苷含量最高。
三、討論
皂苷一般易溶于熱水、含水乙醇、熱甲醇、熱乙醇，幾乎不溶或難溶于乙醚、苯、石油醚等極性較小的有機溶劑。
考慮到甲醇對身體有害，無(wú)水乙醇提取不完全等因素，選擇乙醇水溶液作為提取溶劑。
根據文獻選用含一定濃度的甲醇水溶液和石油醚(氯仿)回流提取，用TLC檢查得不到薯蕷皂苷元的斑點(diǎn)。
原因是苷類(lèi)水解時(shí)有醇存在，長(cháng)時(shí)間加熱可引起其他副反應，皂苷元往往會(huì )發(fā)生脫水、環(huán)合、雙鍵位移和構型改變等變化。
在實(shí)驗過(guò)程中根據文獻采用活性炭脫色5 min，結果測定吸光度值非常小，原因是活性炭吸附某些苷類(lèi)物質(zhì)。
比色法所顯顏色隨顯色溫度和時(shí)間變化而變化，因此，必須嚴格控制條件，盡量排除干擾。
本實(shí)驗選用的顯色條件穩定。
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