免疫膠體在醫學(xué)檢驗的進(jìn)展優(yōu)秀論文
一、定性檢測法
免疫膠體金定性檢測法主要有斑點(diǎn)免疫金滲濾法(DIGFA)和膠體金免疫層析法(GICA)。二種方法都具有檢測快速、簡(jiǎn)單、特異性強、靈敏度高、抗基質(zhì)干擾強等優(yōu)點(diǎn),因此是一種適合基層現場(chǎng)篩查的快速檢測方法。
1.斑點(diǎn)免疫金滲濾法
免疫金滲濾技術(shù)在上世紀80年代中期從固相酶免疫檢定技術(shù)上發(fā)展出來(lái)的。斑點(diǎn)免疫金滲濾法作為一種初篩試驗手段，體現了較高的早期診斷價(jià)值，有著(zhù)很好的實(shí)用前景。李春暉等人認為在糞便隱血檢測中，膠體金滲濾法的靈敏度、抗干擾能力均優(yōu)于鄰甲苯胺法。李如林等利用ELISA、流式微球載體技術(shù)(FMA)和膠體金滲濾三種不同方法進(jìn)行血清梅毒抗體檢測，結果顯示ELISA、FMA和DIGFA的三種方法靈敏度分別為96.00%、100%和94.00%，三種方法的特異性均為100%，提示三種方法的檢測結果具有極強的一致性。
2.膠體金免疫層析法
上世紀90年代初，在免疫金滲濾技術(shù)的基礎上又建立了一種更為簡(jiǎn)易快速的免疫層析檢測技術(shù)。Marot-Leblond等采用GICA法進(jìn)行陰道念珠菌檢測,結果敏感性為100%,特異性為82%,優(yōu)于傳統革蘭染色鏡檢和微生物培養。方春元等用膠體金早早孕定性檢測試驗和化學(xué)發(fā)光免疫法進(jìn)行比較：2.0IU以下與陰性的符合率為100%、2.0～1000.0IU與弱陽(yáng)性的符合率為97.2%、1000.0IU以上與強陽(yáng)性的符合率為97.5%，二者結果有著(zhù)較好的一致性。王玉金等建立了一種霍亂弧菌O139膠體金免疫層析快速檢測法，檢測霍亂弧菌O139群的最低檢出濃度為1×105CFU/ml；與細菌培養法對比檢測184份臨床標本，特異性和靈敏度均達100％。Brunt等采用GICA技術(shù)檢測大腸桿菌O157,檢測限為500個(gè)細菌。梁秋光等用GICA檢測含鼠疫陽(yáng)性參考血清的鼠型動(dòng)物溶血血清45份，結果全部陽(yáng)性，而間接血凝微量法的對照結果則無(wú)法判斷，表明GICA法在應對溶血血清方面有著(zhù)很大的優(yōu)越性。孟芳等對心臟疾病患者進(jìn)行心肌三聯(lián)測試，其靈敏度肌紅蛋白為100%、肌酸肌酶同工酶為96.3%和肌鈣蛋白為85.2%；結果表明膠體金法心肌三聯(lián)檢測卡，對診斷急性心肌梗死具有較好的臨床診斷價(jià)值。
二、半定量、定量檢
測膠體金本身具有明顯的紅色或粉紅色，可用肉眼與光學(xué)傳感器判斷檢測線(xiàn)(T)的顏色深淺，進(jìn)行半定量、定量分析。
1.半定量檢測法
早期就有人提出硝酸纖維素膜上的顯色面積與抗體濃度呈正相關(guān)，從而建立了半定量測定方法；曹丹如等建立一種伴有定量質(zhì)控點(diǎn)的斑點(diǎn)免疫金滲濾法，可半定量檢測人尿中的微量白蛋白。該立法與散射免疫濁度法的結果符合性良好，已經(jīng)達到了對尿微量白蛋白篩查試驗的臨床要求。
2.定量檢測法
隨著(zhù)膠體金免疫定量檢測儀的出現，開(kāi)創(chuàng )了一種新型的快速定量分析方法。定量分析方法的原理是基于硝酸纖維素膜上檢測線(xiàn)(T)的顏色深淺與待測物濃度呈現一定的比例關(guān)系；利用光學(xué)傳感器對試劑條進(jìn)行掃描，與事先制定的標準曲線(xiàn)對比，從而得出定量分析的結果。由于膠體金試紙條檢測線(xiàn)顯色是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，試紙條的生產(chǎn)工藝、檢測時(shí)的工作環(huán)境以及待測樣本的差異性等因素都會(huì )影響到這一動(dòng)態(tài)顯色的結果。因此有人提出了一種檢測線(xiàn)(T)/質(zhì)控線(xiàn)(C)比值定量法。T/C比值法是依據硝酸纖維素膜上的T、C線(xiàn)顯色反應的影響因素基本一致，通過(guò)T、C線(xiàn)吸光值的比值，在一定程度上可以消除時(shí)間、溫度和待測樣本等因素對試紙條顯色過(guò)程的影響，是一種較為合理的定量檢測方法。謝士嘉等建立的膠體金免疫層析定量方法，能準確地檢測樣品中的金黃色葡萄球菌腸毒素B，其檢出限為8ng/ml，線(xiàn)性范圍為8~1000ng/ml。聶聰等所建立的基于T/C比值的膠體金免疫層析方法,對相思子毒素檢測的靈敏度已達到為30ng/ml，線(xiàn)性范圍30~600ng/ml，敏感性與ELISA法相近，已達到臨床檢測范圍。
三、膠體金技術(shù)的其他應用
1.在免疫電鏡上的應用
隨著(zhù)膠體金技術(shù)的不斷發(fā)展，人們將其與電鏡技術(shù)相結合，逐步形成了膠體金免疫電鏡技術(shù)。它具有靈敏度高、特異性強、定位精確等優(yōu)點(diǎn)。吳淑燕等建立膠體金標記血小板膜糖蛋白的免疫電鏡技術(shù)，結果表明利用膠體金技術(shù)可以顯著(zhù)的提高樣品的檢出率，為開(kāi)展血小板功能研究奠定基礎。
2.在納米磁與核酸適配體上的應用
納米磁分離-膠體金與核酸適配體-膠體金為當前二種新型的膠體金技術(shù)。納米磁性微粒和核酸適配體作為特異性識別元件，能夠將靶分子從成分復雜的生物體系中分離出來(lái)，起到樣品的濃縮作用，從而提高檢測的靈敏度和檢出率。
3.在多項聯(lián)合檢測技術(shù)上的應用
多項聯(lián)合檢測技術(shù)可以同時(shí)檢測多種成分，能節省大量的檢測時(shí)間和成本，具有很大的應用價(jià)值，是未來(lái)的發(fā)展方向。吳堅美等建立了一種新型膠體金免疫層析試紙條，可同時(shí)檢測巨細胞病毒、風(fēng)疹病毒、弓形蟲(chóng)和單純皰疹病毒的4種抗體；與ELISA法對比，其符合率為97.90%~100%。吳文曄等建立了一種能同時(shí)檢測檢測黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A兩種真菌毒素的膠體金試紙條，二種毒素的靈敏度均可達到2.5μg/L，且二者之間互不干擾，重復性、穩定性均良好。
四、結語(yǔ)
作為一種新的免疫學(xué)方法，免疫膠體金技術(shù)是繼免疫酶標技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)之后的第四大免疫標記技術(shù)。與其他方法比較，具有快捷方便等優(yōu)勢，但也存在著(zhù)檢測結果易受到試驗環(huán)境因素的影響等不足。如血、尿等標本形成的試紙條背景噪聲，對儀器定量分析有明顯的干擾作用。另外，免疫膠體金與其他傳統檢測方法相比，在檢出率、靈敏度方面都還存在一定的差異。有報道以ELISA法為標準時(shí)，免疫膠體金法測定HBsAg的檢出率為56.76%(105/185)；以電化學(xué)發(fā)光免疫分析法為標準時(shí)，檢出率只有為32.00％(16/50)。穆煜等將膠體金免疫層析法甲型/乙型流感快速檢測試劑用于H1N1型流感病毒的篩查，其陽(yáng)性預示值為40.0%，陰性預示值為95.8%；實(shí)驗靈敏度為66.7%，診斷特異性是88.5%。認為此法作為初步篩查實(shí)驗時(shí)還具有一定的局限性。由此可見(jiàn)，有必要建立一套膠體金制備的質(zhì)量標準體系，以保證試劑質(zhì)量，提高檢測穩定性。同時(shí)將免疫膠體金與其他不同平臺相結合，可使其檢測技術(shù)再上一個(gè)新的臺階，在醫學(xué)檢驗領(lǐng)域的應用也會(huì )更為廣泛，對于急診標本或疫情現場(chǎng)的快速檢測都有著(zhù)重大意義。
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