論析當歸六黃湯分煎的臨床運用

　　藥學(xué)是連接健康科學(xué)和化學(xué)科學(xué)的醫療保健行業(yè)，它承擔著(zhù)確保藥品的安全和有效使用的職責。藥學(xué)主要研究藥物的來(lái)源、炮制、性狀、作用、分析、鑒定、調配、生產(chǎn)、保管和尋找(包括合成)新藥等。主要任務(wù)是不斷提供更有效的藥物和提高藥物質(zhì)量，保證用藥安全，使病患得以以傷害最小，效益最大的方式治療或治愈疾病。

　　論析當歸六黃湯分煎的臨床運用

　　【摘要】目的對當歸六黃湯分煎與合煎樣品中阿魏酸的含量進(jìn)行比較，從而為其臨床應用提供依據。

　　方法采用反相液相色譜法，DIKMA ODS-C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，流動(dòng)相為0.085%磷酸-乙腈，流速1.0 ml·min-1，柱溫35℃，檢測波長(cháng)326 nm。

　　結果當歸六黃湯分煎樣品中阿魏酸含量明顯高于合煎樣品。

　　結論能為當歸六黃湯分煎顆粒的臨床應用提供一定的參考。

　　【關(guān)鍵詞】當歸六黃湯 阿魏酸 高效液相色譜法

　　當歸六黃湯出自李東垣《蘭室秘藏》，由當歸、生地黃、熟地黃、黃連、黃柏、黃芩、黃芪7味中藥組成。

　　用于發(fā)熱盜汗，面赤心煩，口干唇燥，大便干結，小便黃，舌紅苔黃，脈數。

　　主治陰虛火旺證。

　　臨床上常用于治療陰虛火旺所致的盜汗。

　　隨著(zhù)人們生活水平的提高、生活節奏的加快，近年出現了中藥配方顆粒。

　　中藥配方顆粒是以批量的單味中藥飲片為原料，分別加水煎煮、濃縮、干燥而得，經(jīng)單劑量包裝，使用時(shí)按處方混合后開(kāi)水沖服，與中藥湯劑的分煎相似。

　　傳統中藥湯劑是按方配藥，加水共煎而得，即合煎。

　　中藥配方顆粒湯劑與傳統湯劑的化學(xué)成分、藥效是否有明顯的差異，中藥配方顆粒是否應廣泛應用于臨床，還存在爭論。

　　本實(shí)驗以當歸中阿魏酸為指標性成分，采用HPLC法比較該方“分煎”和“合煎”制得的湯劑中阿魏酸的含量是否有差異，從中藥復方湯劑中有效成分的含量方面為中藥配方顆粒應用于臨床提供一定理論依據。

　　一、儀器與試藥

　　Aglient1100高效液相色譜儀(包括真空脫氣機，自動(dòng)進(jìn)樣器，四元泵，DAD檢測器)，HP1100/ WIND3D化學(xué)工作站。

　　阿魏酸對照品(批號:110773-200611，供含量測定用)購自中國藥品生物制品檢定所;甲醇為色譜純;水為純凈水;其它試劑均為分析純。

　　藥材經(jīng)貴陽(yáng)中醫學(xué)院生藥實(shí)驗室董麗莎教授鑒定，當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensia(Oliv.)Diels的干燥根，黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，

　　黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.的干燥根莖，黃柏為蕓香科植物黃皮樹(shù)Phellodendron chinense Schneid.的干燥樹(shù)皮，黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var. mongholicus (Bge.)Hsiao的干燥根，地黃為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch.的新鮮或干燥塊莖。

　　二、方法與結果

　　2.1 色譜條件色譜柱為DIKMA ODS-C18(5 μm， 4.6 mm×250 mm);以0.085%磷酸-乙腈為流動(dòng)相梯度洗脫，0～31 min乙腈14.5%，31～40 min乙腈60%，40～48 min乙腈14.5%; 流速1.0 ml/min;檢測波長(cháng)326 nm，柱溫35℃。

　　2.2 對照品溶液的制備精密稱(chēng)定阿魏酸對照品適量，加70%甲醇制成每毫升含12.48 μg溶液，備用。

　　2.3 供試品溶液制備分別精密稱(chēng)取干燥的當歸六黃湯分煎與合煎浸膏粉約1.0 g，置250 ml圓底燒瓶中，加70%甲醇100 ml，稱(chēng)重，加熱回流30 min，放冷，補重，過(guò)濾，取續濾液過(guò)0.45 μm微孔濾膜即得供試品溶液。

　　2.4 陰性樣品的制備按照處方比例稱(chēng)取除當歸外的各味藥材干浸膏粉，混合均勻，稱(chēng)取適量，按照“2.3”項下的方法制備，在“2.1”項的色譜條件下進(jìn)行測定，在阿魏酸出峰位置陰性對照液無(wú)干擾。

　　按照處方稱(chēng)取除當歸外的各味藥材，加20倍量的水，煎煮至10倍量，濃縮，減壓干燥。

　　得干浸膏粉,稱(chēng)取適量，按照“2.3”項的制備方法進(jìn)行制備，在“2.1”項下的色譜條件下進(jìn)行測定，在阿魏酸出峰位置陰性對照液無(wú)干擾。

　　對照品、樣品色譜見(jiàn)圖1～3。

　　2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液1，2，4，6，8，10 ml于10 ml容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度,搖勻。

　　在上述色譜條件下進(jìn)樣10 μl，按上述色譜條件測定峰面積。

　　以峰面積積分值(A)為縱坐標，進(jìn)樣量(X)為橫坐標，繪制標準曲線(xiàn)，計算得回歸方程為A=5 613.1C-0.818 6,r=0.999 7，阿魏酸在0.012 48～0.124 8 μg范圍內線(xiàn)性關(guān)系良好。

　　2.6 精密度實(shí)驗精密吸取阿魏酸對照品溶液10 μl，連續進(jìn)樣6次,在上述色譜條件下測定峰面積，結果RSD=0.31%，表明精密度良好。

　　2.7 重復性實(shí)驗精密稱(chēng)取同一批分煎浸膏粉、合煎浸膏粉各6份，按上述供試品溶液的制備方法和色譜條件測定，計算阿魏酸的含量，RSD分別為0.0104%(n=6)、0.8841%(n=6)。

　　結果表明該方法具有良好的重復性。

　　2.8 穩定性實(shí)驗精密稱(chēng)取分煎浸膏粉、合煎浸膏粉各1.0 g,按供試品溶液的制備方法處理，分別在0，1.5，3，4.5，6 h進(jìn)樣，按上述色譜條件下測定，RSD分別為2.40%，2.22%，表明當歸六黃湯分煎、合煎樣品溶液在6 h內穩定。

　　2.9 加樣回收率實(shí)驗分別精密稱(chēng)取已知含量分煎浸膏粉、合煎液浸膏粉各9份，加入適量阿魏酸對照品溶液，按供試品溶液制備方法處理，上述色譜條件下測定，RSD分別為2.05%，1.95%。

　　2.10 樣品含量測定按照供試液制備方法分別處理6份樣品，在“2.1”項色譜條件下進(jìn)行測定，結果分煎樣品與合煎樣品平均含量(mg/處方)分別為：5.411，2.973。

　　2.11 當歸六黃湯分煎樣品與合煎液樣品中平均含量的比較

　　2.11.1 兩種供試品精密度的比較當歸六黃湯分煎、合煎樣品阿魏酸含量分別為 n1=6 1=5.411，n2=6， 2=2.973,計算得 S1=0.000 753，S2=0.000 632;f1=6-1=5，f2=6-1=5查表得F0.05，5,5=5.05 根據公式F=S12S22=1.42

　　2.11.2 兩種樣品中阿魏酸平均含量的比較可求得合并標準偏差為：S=∑(x1i-1)2+∑(x2i-2)2(n1-1)+(n2-1)=7.1×10-4t=︳1-2?Sn1n2n1+n2=59 47.69查表，當置信度為95%，f= n1+ n2-2=10時(shí)， t0.05,10=2.23。

　　t> t0.05,10，故兩種供試品阿魏酸的平均含量之間存在顯著(zhù)性差異。

　　即當歸六黃湯分煎樣品與合煎液樣品中阿魏酸平均含量之間存在顯著(zhù)性差異。

　　三、討論

　　對提取溶媒進(jìn)行考察，根據文獻資料采用不同濃度的甲醇與乙醇回流提取，實(shí)驗結果表明用70%甲醇為提取溶媒時(shí)，阿魏酸的含量較高，且峰形較好。

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　　由于阿魏酸為弱酸，在酸性溶劑中能抑制分解，根據文獻資料采用甲酸∶甲醇(5∶95) 為流動(dòng)相，樣品峰與雜質(zhì)峰分離度達不到要求。

　　采用甲醇-水(35∶65)為流動(dòng)相樣品峰拖尾且與雜質(zhì)峰R<1.5，采用2005版《中國藥典》Ⅰ部當歸中阿魏酸測定項下所用流動(dòng)相乙腈-0.085%磷酸(17∶83)，樣品峰與雜質(zhì)峰R<1.5，峰形難看。

　　調整流動(dòng)相比例進(jìn)行梯度洗脫，0～31 min乙腈14.5%，31～40 min乙腈60%，40～48 min乙腈14.5%,分離度、保留時(shí)間、峰形均好于《中國藥典》方法，故最后采用此流動(dòng)相。

　　當歸六黃湯分煎樣品中阿魏酸含量比合煎樣品高。

　　組方中黃連、黃柏均含有小檗堿,在合煎過(guò)程中酸堿可能發(fā)生中和反應,從而導致合煎樣品中阿魏酸含量偏低。

　　但中藥復方成分復雜，其原因還需作進(jìn)一步深入的考察。

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