三花龍膽中不同部位龍膽苦苷的含量測定
摘要：目的，研究三花龍膽中不同部位龍膽苦苷的含量。方法，采用HPLC法，以甲醇-水(65：35)為流動(dòng)相，274nm為檢測波長(cháng)。結果，三花龍膽中不同部位龍膽苦苷的含量：根>莖>葉>花。
關(guān)鍵詞：三花龍膽 龍膽苦苷 HPLC 含量測定
龍膽入藥歷史悠久，早在《神農本草經(jīng)》中就有關(guān)于龍膽形態(tài)及性味的初步記載，列為中品。龍膽味苦，性寒，入肝、胃經(jīng)，有瀉肝膽實(shí)火，除下焦濕熱的功效。三花龍膽是龍膽的來(lái)源之一，主要分布在黑龍江、吉林、遼寧等地。本文采用HPLC法測定了三花龍膽中不同部位龍膽苦苷的含量，以便于合理的開(kāi)發(fā)新的藥用資源。
1 實(shí)驗材料
1.1 儀器：Waters 515高效液相色譜儀(美國);SPD-10A紫外檢測器;色譜柱(4.6mm×250mm);10μl進(jìn)樣器。
1.2 材料：龍膽苦苷對照品(中國藥品生物制品檢定所);三花龍膽購于哈爾濱市郊，經(jīng)鑒定為龍膽科植物三花龍膽的干燥根、莖、葉及花;甲醇(色譜純)。
2 含量測定
2.1 色譜條件：色譜柱Hypersil C18柱;流動(dòng)相：甲醇-水(65：35);柱溫：室溫;流速：1ml/min;檢測波長(cháng)274nm。
2.2 標準曲線(xiàn)的繪制：精密稱(chēng)取龍膽苦苷對照品12.50mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別取對照品溶液2、4、6、8、10μl，測得各峰面積。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算得回歸方程：Y=1.38×106X+6.9×104，相關(guān)系數r=0.9996;結果表明龍膽苦膽在2.5～12.5μg呈良好線(xiàn)性關(guān)系。
2.3 精密度試驗：取同一對照品溶液，重復進(jìn)樣5次，每次10μl，連續測定，峰面積RSD為1.31%。
2.4 穩定性試驗：取同一對照品溶液，每20min進(jìn)樣一次，重復進(jìn)樣5次，峰面積的RSD為1.96%，表明在100min內基本穩定。
2.5 重復性試驗：精密稱(chēng)取同一批號龍膽藥材粉末0.5g(n=5)，按樣品液的制備操作，其含量的RSD為1.52%。
2.6 回收率試驗：精密稱(chēng)取已知含量的樣品0.5g(n=5)，分別精密加入龍膽苦苷對照品1.80、1.90、2.00、2.10、2.20(mg)，按樣品液的制備操作，測定，平均回收率為97.57%，RSD為1.81%。
2.7 樣品的含量測定
2.7.1 樣品液的制備：分別稱(chēng)取三花龍膽的不同部位——根、莖、葉、花的干燥粉末(過(guò)4號篩)0.5g(同時(shí)另取本品粉末測定水分)，精密稱(chēng)定，置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，置超聲波清洗中超聲提取40min，取出，搖勻，室溫靜置30min，過(guò)濾至10ml容量瓶中，濾渣用少量甲醇分數次洗滌，洗出液并入濾液中，最后加甲醇至刻度，搖勻。
2.7.2 含量測定：吸取上述根提取液1ml置于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度;莖、葉、花保持原濃度;分別將上述提取液微孔濾膜過(guò)濾，取10μl進(jìn)樣，結果如表1。
表1 不同部位龍膽苦苷的含量
樣品 含量(%)
三年生花1.03
三年生葉1.92
三年生莖3.16
三年生根12.38
3 討論
3.1 試驗表明采用高效液相法進(jìn)行測試，方法簡(jiǎn)便、穩定性好、靈敏度高。
3.2 三花龍膽中龍膽苦苷的含量隨著(zhù)采收的月份不同而不同，而且不同的部位含量也不同，地下部分根及根莖中龍膽苦苷的含量較高，是主要成分部位。地上部分含量較低，總體上含量：根>莖>葉>花。
3.3 在超聲提取三花龍膽時(shí)，以超聲震蕩器高頻震蕩40min為最好，延長(cháng)震蕩時(shí)間，龍膽苦苷的含量未見(jiàn)增加，可見(jiàn)40min龍膽苦苷已提取完全。
參考文獻
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