硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體的釋放度和藥效學(xué)研究
想到寫(xiě)畢業(yè)論文就頭疼，小編為大家整理了藥學(xué)畢業(yè)論文范文，希望能幫助大家緩解頭疼!
【摘要】 目的 考察硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體的體外釋放度及其藥效。方法 采用pH梯度法制備硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體，用透析法測定其體外釋放度和血漿釋放度，通過(guò)抗小鼠S180腫瘤的抑瘤率評價(jià)藥效。結果 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體體外釋放度符合零級動(dòng)力學(xué)模型;聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯修飾的硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體釋放度降低，抑瘤率顯著(zhù)提高。結論 長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體降低藥物釋放度，提高藥效。
【關(guān)鍵詞】 硫酸長(cháng)春新堿 脂質(zhì)體 長(cháng)循環(huán)脂質(zhì)體 釋放度 藥效學(xué)
硫酸長(cháng)春新堿(vincristine, VCR)為長(cháng)春花生物堿類(lèi)抗腫瘤藥物，對白血?⒘馨土鼉哂邢災?钚浴A俅燦τ玫牧蛩岢ご盒錄釵?⑸浼粒?嬖謐乓┪鋨胨テ詼獺⒋?豢�、神�?低澈臀賦Φ藍拘鄖康熱鋇恪S醒芯勘礱鰨??侍遄魑?怪琢鲆┪鐫靨蹇梢愿納埔┪錮砘?災�、提高疗效、綑n拖低澈吞囟ú課唬ㄈ縲腦�、捎z┑畝靖弊饔茫?]。Peter MK等人的研究也表明，硫酸長(cháng)春新堿制成脂質(zhì)體能改善藥物體內行為、提高療效、降低毒副作用[2]。因此，抗腫瘤藥物與脂質(zhì)體結合的處方設計越來(lái)越受到關(guān)注。
本文采用主動(dòng)載藥法中的pH梯度法，以氫化大豆卵磷脂/膽固醇(HSPC/Chol)為脂質(zhì)體膜制備硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體�？疾炝蛩衢L(cháng)春新堿脂質(zhì)體的釋放度和抗小鼠S180腫瘤抑瘤率，同時(shí)考察長(cháng)循環(huán)輔料聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯(CHSPEG2000)對釋放度和抑瘤率的影響，以期為該藥臨床應用提供更好的給藥劑型。
1 實(shí)驗材料
1.1 試藥
硫酸長(cháng)春新堿(廣州環(huán)葉制藥有限公司)，硫酸長(cháng)春新堿對照品(中國藥品生物制品鑒定所)，氫化大豆卵磷脂(HSPC，德國)，膽固醇(Chol，藥用，溫州市甌海食品生化廠(chǎng))，CHSPEG2000 (聚乙二醇單甲醚2000膽固醇琥珀酸酯，自制)，陽(yáng)離子樹(shù)脂(上海樹(shù)脂廠(chǎng))，其他試劑均為分析純。
1.2 儀器
P230高效液相色譜儀(大連依利特)，FC204分析天平(上海精科儀器廠(chǎng))，電熱恒溫水浴鍋(大連醫療器械廠(chǎng))，PHS?25型pH計(上海精科雷磁)，DF?101磁力攪拌器(鞏義市英峪予華儀器廠(chǎng))，透析袋(美國VIKASE公司)，M?110L型微射流儀(美國microfluids公司)。
1.3 動(dòng)物
小白鼠(18～22 g，沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗動(dòng)物中心，SCXK 遼2005-008);家兔(2～3 kg，沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗動(dòng)物中心，SCXK 遼2005—008);S180腫瘤(遼寧省腫瘤研究所)。
2 方法與結果
2.1 pH梯度法制備硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體及包封率測定[3]
2.1.1 HPLC條件
色譜柱：Kromasil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相：甲醇?水?二乙胺(體積比70∶30∶0.5)(磷酸調pH7.0);柱溫：35 ℃;流速：1.2 mL/min;紫外檢測波長(cháng)：298 nm。
2.1.2 空白脂質(zhì)體的制備
將HSPC、Chol按2∶1(質(zhì)量比)混合，加適量無(wú)水乙醇，65 ℃水浴中加熱溶解，揮除乙醇，加枸櫞酸緩沖液(0.3 mol/L，pH 4.30)，65 ℃水化30 min，用微射流儀循環(huán)數次，依次通過(guò)0.8和0.45 μm的微孔濾膜整粒，得空白脂質(zhì)體。將HSPC、Chol、CHSPEG2000按2∶1∶0.2(質(zhì)量比)混合，其他操作同上，得長(cháng)循環(huán)空白脂質(zhì)體。
2.1.3 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體的制備
取空白脂質(zhì)體0.2 mL、硫酸長(cháng)春新堿溶液(1.0 g/L)1.0 mL和Na2HPO4溶液(0.375 mol/L;pH 9.0)0.8 mL混勻(pH 7.3)，于60 ℃孵化10 min，得硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體。取長(cháng)循環(huán)空白脂質(zhì)體同法操作，得長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體。
2.1.4 硫酸長(cháng)春新堿標準曲線(xiàn)制備
取硫酸長(cháng)春新堿對照品儲備液(0.1 g/L)，用70%(體積分數)甲醇配制成1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 mg/L的系列溶液，濾過(guò)，HPLC測定;以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(ρ)線(xiàn)性回歸，得回歸方程A=14.5ρ+3.1(r=0.999 9)，線(xiàn)性范圍1.0～12.5 mg/L。
2.1.5 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體藥物回收率測定
取0.8，1.0，1.2 g/L的硫酸長(cháng)春新堿溶液各1 mL，分別加入空白脂質(zhì)體0.2 mL和Na2HPO4溶液0.8 mL，制備不同濃度硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體。取各濃度脂質(zhì)體各0.3 mL分別置于5 mL量瓶中，以去離子水定容，搖勻，再取1.5 mL于5 mL量瓶中，以甲醇定容，搖勻，濾過(guò)，HPLC法測定。代入標準曲線(xiàn)計算藥物含量，進(jìn)而計算回收率。結果表明，硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體中藥物回收率為98.1%～101.8%。
2.1.6 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體包封率的測定
1.2”中硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體0.3 mL兩份，一份置5 mL量瓶中，以去離子水定容，再取1.5 mL于5 mL量瓶中，以甲醇定容，混勻，濾過(guò);另一份上陽(yáng)離子樹(shù)脂柱，以去離子水洗脫，收集5 mL洗脫液，再取1.5 mL于5 mL量瓶中，以甲醇定容，混勻，濾過(guò)。HPLC測定，計算包封率：包封率=A過(guò)柱/A未過(guò)柱，其中A過(guò)柱表示脂質(zhì)體包封的硫酸長(cháng)春新堿的色譜峰面積;A未過(guò)柱表示總的硫酸長(cháng)春新堿的色譜峰面積。
結果表明，硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體的包封率為86.9%，長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體包封率提高到92.8%。
2.2 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體體外釋放度的考察
2.2.1 分析方法建立
將4 mL空白脂質(zhì)體裝入預處理好的透析袋中，于37 ℃生理鹽水(100 mL)中透析10 h，取外層透析液用紫外分光光度計于298 nm測定吸光度(λVCR 297.8 nm)，吸收值為零。說(shuō)明空白脂質(zhì)體在10 h內未通過(guò)透析袋，可采用透析法測定硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體的體外釋放度。
2.2.2 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體體外釋放度的測定
取硫酸長(cháng)春新堿溶液、硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體和長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體各4 mL，分別加入預處理好的透析袋中，再分別置于37 ℃生理鹽水中透析，定時(shí)取透析液2 mL，并補加等量生理鹽水。將透析液濾過(guò)，測定藥物濃度，計算通過(guò)半透膜的藥物累積釋放量Mt，進(jìn)而計算累積釋放度，結果見(jiàn)圖1。
Mt=cnV0+∑ni=1ci-1V
其中，V0為釋放介質(zhì)體積,cn為第n次取樣時(shí)濃度,V為取樣體積。
將硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體和長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體中藥物累積釋放度(F)對時(shí)間(t)線(xiàn)性擬合，方程分別為F=3.1t+0.9 (r=0.998 5)和F=0.8t+0.7 (r=0.998 0)，表明兩種脂質(zhì)體均符合零級釋藥模型。由方程斜率可知，CHSPEG2000修飾可降低脂質(zhì)體中藥物釋放速率，10 h硫酸長(cháng)春新堿的釋放度由32.43%降低到8.6%。
2.3 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體血漿釋放度的考察
2.3.1 硫酸長(cháng)春新堿水溶液標準曲線(xiàn)制備
取硫酸長(cháng)春新堿對照品儲備液(1.0 g/L)，用去離子水配制成5.0，12.5，25.0，37.5，50.0 mg/L的系列溶液，各取2 mL于5 mL量瓶中,分別以甲醇定容。HPLC法測定，以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(ρ)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，方程為A=19.0ρ+2.7(r=0.999 6)，線(xiàn)性范圍2.0～20.0 mg/L。
2.3.2 硫酸長(cháng)春新堿血漿溶液標準曲線(xiàn)制備
取硫酸長(cháng)春新堿對照品儲備液(1.0 g/L)用血漿配制成5.0，12.5，25.0，37.5，50.0 mg/L的系列溶液，各取2 mL于5 mL量瓶中甲醇定容，混勻，15 000 r/min離心5 min，取上清液過(guò)濾進(jìn)樣，得回歸方程A=18.3ρ+2.3(r=0.998 9)，線(xiàn)性范圍2.0～20.0 mg/L。
2.3.3 血漿中硫酸長(cháng)春新堿回收率的測定
配制5.0，10.0，15.0 mg/L的硫酸長(cháng)春新堿血漿溶液，按“2.3.2”方法操作，HPLC測定A，代入水溶液標準曲線(xiàn)，求算藥物濃度，并計算回收率。結果表明，血漿中藥物回收率為97.9%～102.1% 。
2.3.4 陽(yáng)離子樹(shù)脂對血漿中硫酸長(cháng)春新堿的吸附
配制系列濃度的硫酸長(cháng)春新堿血漿溶液(40～120 mg/L)，37 ℃水浴孵化10 min，各取1 mL溶液，分別上陽(yáng)離子樹(shù)脂柱，以去離子水洗脫，收集洗脫液，取2 mL置于5 mL量瓶中，以甲醇定容，HPLC法測定。結果表明，過(guò)陽(yáng)離子樹(shù)脂的溶液未檢測出硫酸長(cháng)春新堿，說(shuō)明陽(yáng)離子交換樹(shù)脂能完全吸附血漿中游離和蛋白結合的硫酸長(cháng)春新堿，此法可以檢測脂質(zhì)體的血漿釋放度。
2.3.5 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體血漿釋放度的測定
取硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體和長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體各4 mL(CVCR 0.5 g/L)，分別與20 mL血漿混勻，37 ℃定時(shí)取樣1 mL，上陽(yáng)離子樹(shù)脂柱，以去離子水洗脫，收集洗脫液，取2 mL于5 mL量瓶中，以甲醇定容。HPLC法測定，計算釋放度，結果見(jiàn)圖2。結果表明，硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體和長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體在血漿中24 h分別釋放61.5%和51.4%。
2.4 硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體的藥效學(xué)研究
將復蘇的S180細胞接種于小鼠腹腔內，約5天抽出腹水用生理鹽水稀釋后傳代。將接種S180腫瘤的小鼠隨機分為4組：模型組、硫酸長(cháng)春新堿溶液組、硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體組、長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體組，每組10 只，右側腋下接種(0.2 mL/只)，第3、6、9、12 天尾靜脈注射給藥，第15 天將小鼠拉斷頸椎處死，剝離瘤體稱(chēng)重。結果表明，各給藥組與模型組比較，差異均有顯著(zhù)性(P<0.01);長(cháng)循環(huán)脂質(zhì)體組與溶液組比較，差異有顯著(zhù)性(P<0.05)，而脂質(zhì)體組與溶液組差異則無(wú)顯著(zhù)性，見(jiàn)表1。表1 各組瘤重結果
3 討 論
3.1 脂質(zhì)體血漿釋放度作為體外檢測手段可以為體內釋放度的預測提供依據。本文采用陽(yáng)離子樹(shù)脂分離血漿中的脂質(zhì)體和硫酸長(cháng)春新堿，用HPLC法測定脂質(zhì)體包封的藥物含量，進(jìn)而計算硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體釋放度。結果表明，長(cháng)循環(huán)脂質(zhì)體比硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體藥物釋放度低，說(shuō)明長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體體內循環(huán)時(shí)間延長(cháng)，更有利于發(fā)揮藥效。
3.2 藥效學(xué)試驗中，用SPSS10.0統計軟件對各組瘤重進(jìn)行多樣本均數間多重比較。結果表明，各給藥組與模型組比較，差異均有顯著(zhù)性(P<0.01);長(cháng)循環(huán)脂質(zhì)體組與溶液組比較，差異有顯著(zhù)性(P<0.05)，而脂質(zhì)體組與溶液組差異則無(wú)顯著(zhù)性。其原因可能是，脂質(zhì)體靜脈給藥后易被網(wǎng)狀內皮系統細胞，特別是單核吞噬細胞作為外來(lái)異物吞噬，且體內成分會(huì )導致脂質(zhì)膜破壞，使藥物滲漏，不能更好發(fā)揮藥效;CHSPEG2000修飾的長(cháng)循環(huán)脂質(zhì)體可以避開(kāi)單核吞噬細胞的吞噬，使更多藥物到達腫瘤部位發(fā)揮療效。因此，長(cháng)循環(huán)硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體可以明顯提高抑瘤率，增強療效。
3.3 CHSPEG2000為本實(shí)驗室合成的一種新型脂質(zhì)體修飾材料。脂質(zhì)體形成過(guò)程中，CHSPEG2000分子的膽固醇端嵌入脂質(zhì)體膜中，PEG端向外伸展形成親水層。在體外PEG層可以防止脂質(zhì)體因融合而造成的藥物滲漏和粒徑增大，并能提高脂質(zhì)體的包封率;在體內PEG層可以防止脂質(zhì)體被巨噬細胞吞噬，有助于更好的發(fā)揮藥效。
【參考文獻】
[1]LAYTON D, TROUET A. A comparison of the therapeutic effect of free and liposomally encapsulated vincristine in leukemia mice[J]. Eur J Cancer,1980,16: 949.
[2]PETER M K, GRAY M K, GRAY M B, et al. Liposome encapsulated vincristine :preclinical toxicologic and pharmacologic comparison with free vincristine and empty Liposomes in mice, rats and dogs[J].Anti Cancer Drug,1994(5): 579.
[3]趙妍，于彬，鄧意輝，等.主動(dòng)載藥法制備硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體及其包封率的測定
【硫酸長(cháng)春新堿脂質(zhì)體的釋放度和藥效學(xué)研究】相關(guān)文章：
硫酸購銷(xiāo)合同12-22
硫酸購銷(xiāo)合同常用12-15
釋放自己英語(yǔ)作文04-06
李姓歷史和現狀的研究報告05-07
‘釋放師生潛能’課堂教學(xué)觀(guān)摩活動(dòng)體會(huì )12-06
關(guān)于劉姓的歷史和現狀的研究報告作文[優(yōu)秀]02-18
- 相關(guān)推薦