水環(huán)境糞大腸菌群監測2種分析方法的對比論文
糞大腸菌群是監測水體是否被糞便污染的指示菌，是監測地表水尤其是飲用地表水的重要指標之一。它是總大腸菌群的一部分，其基本性狀和總大腸菌群相似。在實(shí)驗時(shí)，將培養溫度提高到44.5°C，我們把可以在此條件下生長(cháng)并發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣的，稱(chēng)糞大腸菌群。
經(jīng)典的糞大腸菌群的監測方法是采用多管發(fā)酵法，但這種方法具有前期準備時(shí)間長(cháng)、任務(wù)繁重;培養過(guò)程中操作繁瑣的缺點(diǎn)，并且事后還要清洗大量的試管，浪費人力、物力、財力。為此很多廠(chǎng)家研發(fā)了大腸菌群的快檢紙片。采用紙片法，大大縮短了實(shí)驗的時(shí)間，并且根本不需要再清理大量的試管，減輕了勞動(dòng)強度，也節約了寶貴的水資源。那么，多管發(fā)酵法和紙片法的數據究竟有沒(méi)有相關(guān)性?作者采用某廠(chǎng)生產(chǎn)的大腸菌群的快檢紙片通過(guò)對比實(shí)驗旨在探討這個(gè)問(wèn)題。
一、分析方法
1、多管發(fā)酵法
(1)培養基
單倍和三倍乳糖蛋白胨培養液(培養液的成分與制備略，下同)
EC培養液
(2)步驟
�、偎畼咏臃N量：將水樣充分混勻后，根據水樣污染的程度確定水樣的接種量，每個(gè)樣品至少用3個(gè)不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五管。
如果接種的體積為10ml，則接種于含有三倍濃度5ml的乳糖蛋白胨培養液的試管內，如果接種量為1ml或者小于1ml，則接種于含有單倍濃度10ml的乳糖蛋白胨培養液的試管內。
�、诔醢l(fā)酵：
將接種了水樣的試管，在37±0.5°C下培養24±2h，產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明實(shí)驗陽(yáng)性。如產(chǎn)氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽(yáng)性。
�、蹚桶l(fā)酵試驗
輕微振蕩初發(fā)酵陽(yáng)性的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)將培養物轉接到EC培養液中。在44±0.5°C水浴中培養24±2h，培養后立即觀(guān)察。發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣表明確信試驗陽(yáng)性。
�、苡嬎愫蛨蟾娼Y果
根據不同接種量的發(fā)酵管所出現的陽(yáng)性結果的數目，從MPN表中查相應的MPN指數，計算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。
2、紙片法
采用某廠(chǎng)生產(chǎn)的大腸菌群快檢紙片
�、偎畼咏臃N量：將水樣充分混勻后，根據水樣污染的程度確定水樣的稀釋倍數，每個(gè)樣品至少用3個(gè)不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五個(gè)紙片。
如果接種的體積為10ml，則接種于大紙片內。如果接種量為1ml或者小于1ml，則接種小紙片內。
�、诎l(fā)酵試驗
樣品接種后在44±0.5°C的恒溫培養箱中培養10-16小時(shí)后，觀(guān)察結果。
�、塾嬎愫蛨蟾娼Y果
紙片說(shuō)出現紅點(diǎn)，其周?chē)庶S色者為陽(yáng)性。根據不同接種量的紙片所出現的陽(yáng)性結果的數目，從MPN表中查相應的MPN指數，計算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。
二、t檢驗的結果
根據成對樣本的假設檢驗，對這2組數據進(jìn)行成對數據平均數的比較，看它們有無(wú)顯著(zhù)性差異。
(公式略)
計算結果：t=0.648,查“t值表”，df=14-1=13,t0.01,13=3.012,現實(shí)得t0.01。
推斷：認為2種試驗方法沒(méi)有顯著(zhù)性差異。
三、結論
紙片法和多管發(fā)酵法監測的結果沒(méi)有顯著(zhù)性差異，用紙片法取代多管發(fā)酵法完全可行。
(一)與傳統的多管發(fā)酵法相比，紙片法具有如下優(yōu)點(diǎn)：
1、時(shí)間短——10-16小時(shí)出檢測結果，大大縮短了監測時(shí)間;
2、降低了監測人員的工作強度——省去了煩瑣的前期培養基的配制、分裝、滅菌，后期洗刷試管，中期重新接種、培養等工作;
3、結果易于判斷——根據顏色識別，不用費力觀(guān)察氣泡，檢測結果判定簡(jiǎn)單直觀(guān);
(二)在使用紙片法時(shí)，筆者認為需要注意以下幾點(diǎn)：
1、對取樣量為1ml的紙片，移液管要在紙片的中央放液，使樣品均勻的向四周擴散。
2、取樣量為10ml的紙片，因為水樣不能完全被紙片吸收，要盡量避免接種后和培養時(shí)水樣流出，造成誤差。
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