探討薄層掃描測定蛇床子素含量的優(yōu)點(diǎn)-職稱(chēng)論文

畢業(yè)論文

蛇床子為傘形科植物蛇床［Cnidium monnieri(L)Cuss.］的干燥成熟果實(shí)，具有溫腎壯陽(yáng)、燥濕、祛風(fēng)殺蟲(chóng)之功效［1］，中醫主要用來(lái)治療外陰濕疹、瘙癢、滴蟲(chóng)性陰道炎、急性滲出性皮膚病等病癥。蛇床子主產(chǎn)于河北、山東、江蘇、浙江、4川等地，分布遍及全國各地，其主要有效成分為數種香豆素類(lèi)化合物，其中蛇床子素是主要活性成分，含量最高，約占0.8%左右，約占總香豆素的60%［2］。蛇床子素（甲基歐芹酚Osthole, Ost）分子式為C15H16O3，化學(xué)名稱(chēng)為7–甲氧基–8–異戊烯基香豆素，分子量244.29。蛇床子素有降壓作用［3］，心臟抑制作用［4］，促學(xué)習記憶作用［5］，性激素樣作用［6～8］，調節骨代謝 ［9, 10］，增強免疫力等作用［10］。蛇床子素具有很高的臨床應用價(jià)值，本實(shí)驗以薄層掃描法為測定其含量的方法優(yōu)選了提取工藝從而為其在臨床上的應用做好了前期的工作。

    1  材料與方法

    1.1  藥品與儀器

    1.1.1  藥品  中藥蛇床子，產(chǎn)地河北，購于張家口市華佗藥房；蛇床子素標準品購于南京青澤綠生植物有限公司；石油醚,乙醇,甲醇,乙酸乙酯均為分析純；CMC-Na硅膠G板（市售，10cm×5cm）。

    1.1.2  儀器  WFH-203B型3用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司);KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;KH-3000型薄層色譜掃描儀（上�？普苌�化科技有限公司）;SP-Ⅱ型薄層電動(dòng)點(diǎn)樣器（上�？普苌�化科技有限公司）;RE-52AA型旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)）。

    1.2  方法

    1.2.1  供試品的制備

    回流提�。悍Q(chēng)取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下加熱回流360min，趁熱抽濾，得濾液Ⅰ。重復上1步得濾液Ⅱ、Ⅲ。合并3次濾液在旋轉蒸發(fā)器中75℃恒溫蒸餾。蒸發(fā)至少量液體后，用95%乙醇定容至100mL。1mL溶液相當于0.5g的蛇床子。作為供試品溶液1。

    索氏提�。悍Q(chēng)取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下恒溫索氏提取600min，直至提取器中的乙醇液澄清，制備濾液。蒸餾，乙醇定容，使其每1mL溶液相當于0.5g的蛇床子。作為供試品溶液2。

    超聲波提�。悍Q(chēng)取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下超聲提取40min［11］ 制備濾液。蒸餾，乙醇定容后的濾液作為供試品溶液3。

    1.2.2  對照品溶液的制備

    陽(yáng)性對照品溶液:精密稱(chēng)取蛇床子素標準品10.2mg，用95%的乙醇溶解后定容至2mL，混勻,每1mL溶液相當于5.1mg的蛇床子素標準品。

    陰性對照品溶液:精密稱(chēng)取大黃素標準品10.2mg，用95%的乙醇溶解后定容至2mL，混勻，每1mL溶液相當于5.1mg的大黃素標準品。

    1.2.3  薄層及掃描條件

    蛇床子素標準品在薄層板上點(diǎn)樣后于200～400nm處進(jìn)行光譜掃描，在322nm處有1個(gè)較大吸收峰，在370nm處1個(gè)小吸收峰。為減少誤差采用雙波長(cháng)反射法鋸齒掃描，λS=322nm,λR=370nm，SX=3。采用外標兩點(diǎn)法定量。    以石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶2為展開(kāi)劑在CMC-Na硅膠G板上上行展開(kāi)。1.2.4  點(diǎn)樣及展開(kāi)  用薄層電動(dòng)點(diǎn)樣器按照“對照品2μL，供試品2μL，對照品4μL”  圖1  紫外燈下觀(guān)察結果 (1、3標準品溶液；2供試品溶液）順序點(diǎn)于同1硅膠G板上，上行展開(kāi)25min，晾干后置于365nm紫外燈下觀(guān)察，用直尺對蛇床子素的熒光斑點(diǎn)定位。同法用大黃素（不含蛇床子素）做陰性對照。

    2  結果

    在本實(shí)驗條件下，樣品中的蛇床子素與蛇床子素標準品的熒光斑點(diǎn)重心在同1直線(xiàn)上,斑點(diǎn)圓潤、清晰無(wú)拖尾現象,主斑點(diǎn)與其他斑點(diǎn)分離較好（見(jiàn)圖1）。蛇床子素標準品的Rf值為 0.49±0.04（n=9）。

    3種提取方法得到的蛇床子中蛇床子素的含量結果見(jiàn)表1。表1  不同方法提取蛇床子中蛇床子素含量比較（略 ）

    3  討論

    蛇床子素用展開(kāi)劑系統Ⅰ(石油醚∶乙酸乙酯=15∶2)［12］，在紫外燈下觀(guān)察發(fā)現樣品中的成分尚未分離開(kāi)，依次考察了展開(kāi)劑系統Ⅱ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶1)，系統Ⅲ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=14∶2∶1)，系統Ⅳ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶2)。結果為系統Ⅳ展開(kāi)蛇床子素結果最理想，無(wú)拖尾現象。

    定量分析包括①洗脫測定法：試樣經(jīng)展開(kāi)分離后，將該組分的斑點(diǎn)連吸附劑1齊刮下或取下，然后將該組分從吸附劑上洗脫下來(lái)，收集洗脫液，進(jìn)行定量測定，測定的方法1般采用分光光度法或比色法。②直接測定法：試樣經(jīng)色譜分離后，在薄板上對斑點(diǎn)進(jìn)行直接測定。薄層掃描法定量測定速度快，準確度好，誤差范圍1般在±2%～±5%內操作簡(jiǎn)單，誤差小。

    本實(shí)驗粗略地比較了3種提取方法，結果表明同1溫度下超聲波提取法的提取率最高。從實(shí)際來(lái)看，此實(shí)驗僅為實(shí)驗室提取蛇床子素的初步工作，在此基礎上可優(yōu)選出更好的提取條件，為蛇床子素在藥理方面的研究做好前期工作。【參考文獻】
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