臨床檢驗師考點(diǎn)：酶免疫技術(shù)

　　酶免疫技術(shù)是將抗原抗體反應的特異性和酶高效催化反應的專(zhuān)一性相結合的一種免疫檢測技術(shù)。它是將酶與抗體或抗原結合成酶標記抗體或抗原，此結合物既保留了抗體或抗原的免疫學(xué)活性，同時(shí)又保留了酶對底物的催化活性。

　　技術(shù)原理：

　　免疫酶技術(shù)是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯(lián)結，與相應的抗原或抗體作用后，通過(guò)底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學(xué)技術(shù)。

　　目前應用最多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(ELISA)，它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進(jìn)行的抗原抗體反應均在載體表面進(jìn)行，從而簡(jiǎn)化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實(shí)驗方法包括間接法、夾心法及競爭法。

　　為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯制成的小管、小盤(pán)或小孔)上，然后加被測溶液，倘樣品中有相應抗原，則與抗體在載體表面形成復合物。洗滌后加入酶標記的特異性抗體，后者通過(guò)抗原也結合到載體的表面。洗去過(guò)剩的標記抗體，加入酶的底物，在一定時(shí)間內經(jīng)酶催化產(chǎn)生的有色產(chǎn)物的量與溶液中抗原含量成正比，可用肉眼觀(guān)察或分光光度計測定。

　　為了檢測抗體可用間接法。使抗原吸附于載體上，然后加入被測血清，如有抗體，則與抗原在載體上形成復合物。洗滌后加酶標記的抗球蛋白(抗抗體)與之反應。洗滌后加底物顯色，有色產(chǎn)物的量與抗體的量成正比。

　　常用的酶有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)，相應的底物分別是鄰苯二胺(OPD)和對硝基苯磷酸鹽，前者呈色反應為棕黃色，后者為藍色�？捎媚繙y定性，也可用酶標儀測定光密度(OD)值以反映抗原含量。

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