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艾滋病的實(shí)驗室檢測流程
中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心繼發(fā)布《全國艾滋病檢測技術(shù)規范(2009 年版)》后，近日即將發(fā)布 2015 年版《全國艾滋病檢測技術(shù)規范》，此規范堪稱(chēng)艾滋病檢測實(shí)驗室的「紅寶書(shū)」，適用于疾病控制中心艾滋病確認實(shí)驗室和醫療機構的艾滋病初篩實(shí)驗室的 HIV 檢測技術(shù)操作。下面是小編為大家帶來(lái)的艾滋病的實(shí)驗室檢測流程的知識，歡迎閱讀。
檢測項目的樣品種類(lèi)
1 HIV 抗體檢測：全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品。
2 HIV 抗原檢測：全血、血清、血漿、病毒培養上清液。
3 T 淋巴細胞亞群測定：EDTA 或肝素抗凝全血。
4 HIV-1 病毒載量、基因型、耐藥檢測：血漿、濾紙干血斑(DBS)。
5 HIV 核酸定性與定量、基因型檢測和 HIV-1 分離培養：淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞(PBMC)及全血。
當然，實(shí)驗室最常用的仍然是血液標本，其他只作為補充樣本。
HIV 抗體檢測
HIV 抗體檢測是艾滋病實(shí)驗室檢測的優(yōu)先選擇項目，在國內絕大多數初篩實(shí)驗室應用最廣泛。
1 初篩方法
(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
ELISA 法檢測 HIV 抗體是 HIV 初篩實(shí)驗室最常用最普遍的方法，目前檢測試劑已經(jīng)發(fā)展到第四代，即同時(shí)檢測血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗體，秉承「寧可錯殺一千，不可漏網(wǎng)一個(gè)」的革命精神，其靈敏度遠高于特異性，直叫 HIV 抗體無(wú)處遁形。
(2)化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(CIA/IFA)
這個(gè)試驗方法是近 10 年迅猛發(fā)展的一種新型檢測方法，其采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體，用發(fā)光或熒光儀測定結果，其靈敏度較 ELISA 有了進(jìn)一步的提高，同時(shí)帶來(lái)的是檢測成本的增加和假陽(yáng)性率的增高。
(3)快速檢測(RT)方法
此類(lèi)方法操作簡(jiǎn)便快速，適用于應急檢測、門(mén)診急診檢測，但靈敏度和特異性遠不如 ELISA 和發(fā)光法，但是經(jīng)濟實(shí)惠，也有一定的市場(chǎng)影響力。主要包括以下幾種方法：明膠顆粒凝集試驗(PA)、免疫滲濾試驗、免疫層析試驗。
2 確認實(shí)驗
(1)免疫印跡試驗(WB)
WB 采用間接法檢測樣品中的抗 HIV-1/HIV-2 特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分離開(kāi)來(lái)，經(jīng)過(guò)一系列處理后，硝酸纖維素膜顯示與特異抗原的結合的抗體條帶，從而確診抗體的存在。
(2)條帶/線(xiàn)性免疫試驗(RIBA/LIA)
實(shí)驗原理基本同 WB 法，不再贅述。
HIV-1 抗原檢測
1 篩查實(shí)驗
(1)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(ELISA 法)：即第四代抗原抗體聯(lián)合檢測試劑盒�？贵w包被固相反應孔(管)的底部，待測樣本中 P24 抗原與包被抗體形成抗原抗體復合物，再加入酶(HRP)標記的 HIV-1 抗體與抗原結合，加底物顯色，在酶標儀上讀取結果。因同時(shí)檢測抗原抗體，靈敏度大大提高，有效縮短了 HIV 感染的檢測窗口期，但因試劑成本較高，在普通篩查實(shí)驗室推廣有一定難度。
(2)酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)：待測樣品的 p24 抗原與包被在固相孔(管)內的 p24 抗體結合，并被生物素標記的 p24 抗體識別。臨床實(shí)驗室應用前景不明朗，需要熒光檢測設備，成本較高。
(3)電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)：待測樣品的 p24 抗原與包被抗體的磁性微粒和發(fā)光劑標記的抗體在反應管中溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標記抗體復合物。
(4)抗原抗體快速檢測法：同快速方法(RT)檢測抗體，不同之處是用 HIV 抗體包被載體，檢測靈敏度同樣較差。
2 中和試驗
中和試驗主要是 p24 抗原檢測的補充試驗，還可做 HIV-1RNA 的定性或定量檢測，以排除篩查試驗的假陽(yáng)性。
(1)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(ELISA 法)：待檢樣品先與中和劑(p24 抗原的抗體)共同孵育，如果樣品中存在 p24 抗原，中和抗體將與之結合形成復合物，而不能與固相載體上的捕獲抗體結合。
(2)酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)：原理和檢測步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(ELISA 法)，中和率 ≥ 60 %，認為樣品中的 p24 抗原是真陽(yáng)性。
(3)電化學(xué)發(fā)光法 (ECLIA)：原理和檢測步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(ELISA 法)，中和率大于 50%，認為樣品中的 p24 抗原是真陽(yáng)性。
HIV 核酸檢測
目前國內 HIV 核酸檢測試劑主要為 Taqman 實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測試劑，可檢測血漿、血清、組織器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA，DBS 可用于檢測 RNA/DNA。全球目前正式用于臨床診斷 HIV-1 急性期感染的核酸檢測試劑比較少，主要是美國 FDA 批準的 Gen-Probe 公司生產(chǎn)的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性檢測試劑和歐盟批準的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性檢測試劑。
臨床診斷相關(guān)的檢測策略及結果報告
HIV 檢測陽(yáng)性結果的檢測過(guò)程一般經(jīng)歷兩個(gè)階段，初篩和復檢程序。以 HIV 抗體檢測為例，具體流程如下：
試劑 1 進(jìn)行初篩，結果無(wú)反應，報告「HIV 抗體陰性」;結果有反應，不能出具陽(yáng)性報告，必須進(jìn)入復檢試驗。對初篩有反應的樣品，用原有試劑雙份或雙孔進(jìn)行復檢試驗(或者兩種試劑復檢)，如均無(wú)反應，報告「HIV 抗體陰性」;如均有反應或一個(gè)有反應一個(gè)無(wú)反應，進(jìn)行補充試驗(抗體確證試驗和 HIV-1 核酸試驗)，報告 HIV 感染待確定。
目前大部分臨床實(shí)驗室為艾滋病初篩實(shí)驗室，開(kāi)展常規初篩實(shí)驗，發(fā)現陽(yáng)性結果初步復檢后送省市 CDC 或當地其他確認實(shí)驗室做確認實(shí)驗。
目前國內實(shí)驗室多采用「初篩抗體+WB 法確認」等兩步法進(jìn)行 HIV 檢測及確診，并嚴格進(jìn)行人員、儀器、方法學(xué)質(zhì)量控制，建立了遍布全國的臨床醫療機構的初篩實(shí)驗室及省市 CDC 的確認實(shí)驗室，基本滿(mǎn)足了日益增長(cháng)的艾滋病病人的檢測及病情的變化的監測。
艾滋病基本常識
1、艾滋病的由來(lái)
艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合癥(AcquiredImmunodeficiencySyndrome AIDS)是人類(lèi)免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirusHIV)破壞感染者免疫系統,逐漸導致免疫功能衰竭,最終感染者會(huì )死于任何一種(即使對正常人來(lái)說(shuō)是微不足道的)感染、惡性腫瘤、神經(jīng)系統病變;所以,預防、治療、控制感染是每一個(gè)艾滋病感染者都在關(guān)心的問(wèn)題。
2、艾滋病的癥狀
HIV相關(guān)癥狀:主要表現為持續一個(gè)月以上的發(fā)熱、盜汗、腹瀉;體重減輕10%以上。部分病人表現為神經(jīng)精神癥狀,如記憶力減退、精神淡漠、性格改變、頭痛、癲癇及癡呆等。另外還可出現持續性全身性淋巴結腫大,其特點(diǎn)為除腹股溝以外有兩個(gè)或兩個(gè)以上部位的淋巴結腫大;淋巴結直徑≥1cm,無(wú)壓痛,無(wú)粘連;持續時(shí)間3個(gè)月以上。
3、艾滋病的相關(guān)機會(huì )性感染癥狀
HIV相關(guān)機會(huì )性感染及腫瘤的常見(jiàn)癥狀:發(fā)熱、盜汗、淋巴結腫大、咳嗽咳痰咯血、呼吸困難、頭痛、嘔吐、腹痛腹瀉、消化道出血、吞咽困難、食欲下降、口腔白斑及潰瘍、各種皮疹、視力下降、失明、癡呆、癲癇、肢體癱瘓、消瘦、貧血、二便失禁、尿儲留、腸梗阻等。
如何進(jìn)行自我檢測艾滋病
首先要看自己是否有如下高危行為：性生活比較復雜、男同性戀者、吸毒或是與他人混用注射器、曾被感染有艾滋病毒的針頭或是血制品感染史、母親為艾滋病患者等。
如有高危行為者，若是出現以下兩種或兩種以上情況，要引起高度警覺(jué)：近期體重驟降10%以上、慢性腹瀉或咳嗽長(cháng)達一個(gè)月以上、持續或間歇發(fā)熱達一個(gè)月以上、全身可觸及有淋巴結腫大、反復出現帶狀皰疹或是慢性播散性單純皰疹感染、口咽部有念珠菌感染。
抽血進(jìn)行常規檢查，有不同程度的貧血，同時(shí)白細胞計數減少提示有病毒感染。尿常規可見(jiàn)尿蛋白。
去醫院進(jìn)行HIV—1抗體的檢測，ELISA測定法結果連續兩次為陽(yáng)性者，再行WB法進(jìn)行確診。
從血液、單個(gè)核細胞及腦脊液中如果能夠分離出人免疫缺陷病毒者，可以作為判定感染艾滋病。
得了艾滋病怎么辦
如果有不潔的性行為或者有過(guò)吸毒行為，那么過(guò)了三個(gè)月的窗口期，就應該去醫院進(jìn)行艾滋病篩查。如果醫院的篩查結果是HIV抗體陽(yáng)性，那么還需要去疾控中心做最后確診，如果疾控中心報告結果仍然是陽(yáng)性，那么就確診了，您確實(shí)感染了HIV病毒。
經(jīng)過(guò)篩查確診HIV病毒感染者后，最忌諱的就是恐慌和自暴自棄，應該第一時(shí)間調整心態(tài)，放棄悲觀(guān)的灰色的心情和想法，積極的接受疾控中心的治療。當然，目前世界針對艾滋病的治療除了控制病毒的復制，一般還沒(méi)有有效殺滅病毒的方法�？鼓孓D錄是對抗艾滋病較為有效的方法。而且，疾控中心是免費發(fā)放抗病毒藥物的，關(guān)鍵是在發(fā)現早起就開(kāi)始吃藥。
科學(xué)的用藥的同時(shí)還要調整心態(tài)，如果抑郁，悲觀(guān)，那么打敗你的不是病毒，而是你自己。是你自己低頭放棄了希望。調整好心態(tài)，平和的面對現實(shí)，才能讓我們的身體迸發(fā)活力，更加積極的對抗病毒的侵蝕。所以一個(gè)健康的心態(tài)是對抗艾滋病最有效的手段和途徑。
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