毛畢吸蟲(chóng)成蟲(chóng)分離方法的研究初報

毛畢吸蟲(chóng)成蟲(chóng)分離方法的研究初報 　摘　要　目的　為提高毛畢吸蟲(chóng)成蟲(chóng)的收集率。方法　對家鴨行離體或在體肝靜脈逆行灌注收集肝內和門(mén)靜脈內成蟲(chóng)；同時(shí)對家鴨灌注降主動(dòng)脈，以收集肝內、門(mén)靜脈內和腸系膜靜脈的成蟲(chóng)。結果　應用上述方法可收集到大量活的無(wú)損傷的成蟲(chóng)。結論　灌注法優(yōu)于解剖法，且簡(jiǎn)便、快捷，實(shí)用性強。

PRELIMIARY STUDY ON THE METHODS OF SEPARATING

　　　ABSTRACT Aim To improve the collecting rate of the adult worms of Trichobiharzia.Methods The adult worms in vena portae and hepaticae interna were collected by the methods of exsomatization and retrograde pouring in vena of livers of ducks.The adult worms in livers,vena portae and vena mesenterica of ducks were collected by the method of pouring aorta descendens.Results A lot of non-traumatic living adult worms and non-traumat could be collected by these methords.The collecting rate of the pouring was significantly higher than that of other methords(p＜0.05).Conclusions The method of pouring was more simple,direct,practical and was better than that of dissection.

　　KEY WORDS Trichobiharzia adult worm pouring collecting method

　　毛畢屬（Trichobilharzia）吸蟲(chóng)為鳥(niǎo)類(lèi)血吸蟲(chóng)，其尾蚴可侵襲人體引起變態(tài)反應性皮炎，該屬吸蟲(chóng)宿主較多，家鴨是毛畢屬吸蟲(chóng)主要的終宿主之一［1～10］。從家鴨體內分離出成蟲(chóng)，是研究其形態(tài)、結構并進(jìn)行分類(lèi)的重要基礎。作者在淮河水系毛畢屬吸蟲(chóng)研究的過(guò)程中，對毛畢吸蟲(chóng)成蟲(chóng)的分離方法進(jìn)行了初步研究，取得了較為滿(mǎn)意的結果，現報道如下。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　病鴨　用毛畢屬吸蟲(chóng)尾蚴（50條）人工感染的、并在院動(dòng)物房?jì)蕊曫B30天以上的雛鴨（為當地居民孵化的家鴨）；購自當地居民（漁民及農民）于毛畢吸蟲(chóng)流行水域內放養1年以上的陽(yáng)性家鴨。

　　1.1.2　藥品器材　肝素（Ehter.批號：930407，上海浦江應用生物化學(xué)研究所。）乙醚（Diethylether，批號：960423，宜興市第二化學(xué)試劑廠(chǎng)）、注射器、9號注射針頭、吊瓶、解剖針、橡皮導管、玻璃導管、手術(shù)刀、剪等。

　　1.2　方法

　　1.2.1　肝門(mén)靜脈、腸系膜靜脈解剖法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽(yáng)性的家鴨）固定在解剖臺上，用乙醚麻醉后，剖開(kāi)胸腹部，將肝門(mén)靜脈和肝靜脈結扎，用眼科剪、解剖針和“0”號毛筆剖檢肝門(mén)靜脈和腸系膜靜脈分離成蟲(chóng)。即從較細的腸系膜靜脈開(kāi)始，分段以解剖針刺破靜脈，并以解剖針從靜脈遠端驅趕血液（成蟲(chóng)）從刺破處流出，用毛筆輕取流出血液至含有生理鹽水的平皿中，用生理鹽水反復清洗換水，直至蟲(chóng)體被洗凈為止。最后在解剖鏡下收集成蟲(chóng)。

　　1.2.2　在體肝臟灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽(yáng)性的家鴨）固定在兔解剖臺上，在翅根部靜脈注射2ml肝素鈉（12500U），隨即用乙醚麻醉后剖開(kāi)胸腹部，暴露內臟（操作中應避免劃傷心臟和肝臟）。接著(zhù)在肝靜脈出口遠端和門(mén)靜脈起始端各作一切口，分別插入導入管和導出管（上述兩管可由普通玻璃吸管替代，其長(cháng)短、粗細根據鴨子的大小與靜脈的粗細選用）。將含有生理鹽水的500ml吊瓶，置于2.5m高處，通過(guò)輸液皮條與導入管相連，接通生理鹽水，生理鹽水和成蟲(chóng)一起即可從門(mén)靜脈導出管口流出（抬高導入端解剖臺效果尤佳）。

　　當流出液中含有較多組織液和血液時(shí)，可在量杯中換水沉淀幾次，每次5min。若流出液較清晰，立即吸入小培養皿內，在解剖鏡下或用肉眼直接分檢。

　　1.2.3　離體肝臟灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽(yáng)性的家鴨）固定在解剖臺上，在翅膀根部注射2ml肝素鈉。隨即用乙醚麻醉后解剖，暴露內臟。用止血鉗或縫合線(xiàn)分別夾（扎）住肝靜脈和門(mén)靜脈起始端，仔細分離肝臟，并移至平皿內。然后將連有生理鹽水吊瓶的吸管慢慢插入肝靜脈內，接通生理鹽水進(jìn)行灌注，將門(mén)靜脈流出液倒入300ml量杯內，沉淀，換水2次，緩慢棄去上液，沉淀液倒入小平皿內，在解剖鏡下或手持放大鏡用肉眼直接分檢。

　　1.2.4　肝門(mén)靜脈及腸系膜靜脈同時(shí)灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽(yáng)性的家鴨）固定在解剖臺上，在翅膀根部注入2ml肝素鈉，雛鴨酌減，用乙醚麻醉后，迅速打開(kāi)胸腹腔，暴露內臟。用止血鉗夾住肝靜脈，將連有生理鹽水吊瓶的9號針頭插入降主動(dòng)脈內，隨后將門(mén)靜脈起始端剪斷，用一漏斗放于大、小腸的下方。接通生理鹽水，流出液經(jīng)尼龍網(wǎng)過(guò)濾，將阻留物翻入含生理鹽水的培養皿中，直接鏡檢。

　　2　結果

　　2.1　肝門(mén)靜脈系統和腸系膜靜脈解剖法　分別解剖人工感染毛畢吸蟲(chóng)尾蚴的雛鴨和在當地流行區自然感染的家鴨各20只，共分離到完整的成蟲(chóng)388條（雌蟲(chóng)349條，雄蟲(chóng)39條）。其中從人工感染毛畢屬吸蟲(chóng)尾蚴的雛鴨體內共分離成蟲(chóng)138條（雌蟲(chóng)127條，雄蟲(chóng)11條），每只雛鴨檢獲成蟲(chóng)數目不等，最少3條，最多26條，平均6.9條；從自然感染的家鴨體內共分離成蟲(chóng)250條（雌蟲(chóng)194條，雄蟲(chóng)56條），每只家鴨檢獲的成蟲(chóng)2～72條，平均12.5條。從40只家鴨體內均分離到活體成蟲(chóng)，此外尚有部分蟲(chóng)體斷片。

　　2.2　在體肝臟灌注法　分別灌注人工感染毛畢吸蟲(chóng)尾蚴的雛鴨20只和在當地流行區自然感染的家鴨35只。共分離成蟲(chóng)2546條（雌蟲(chóng)1393條，雄蟲(chóng)1153條）。其中從人工感染毛畢屬吸蟲(chóng)尾蚴的雛鴨體內檢獲成蟲(chóng)699條（雌蟲(chóng)249條，雄蟲(chóng)350條），每只雛鴨檢獲成蟲(chóng)5～38條，平均34.95條；從自然感染的家鴨體內共檢獲成蟲(chóng)1847條（雌蟲(chóng)932條，雄蟲(chóng)915條），每只家鴨檢獲成蟲(chóng)12～86只，平均52.77條。從55只家鴨體內分離到的成蟲(chóng)均為活蟲(chóng)。

　　2.3　離體肝臟灌注法　分別灌注人工感染的病鴨6只和自然感染的病鴨10只，共分離成蟲(chóng)2495條（雌蟲(chóng)1215條，雄蟲(chóng)1280條）。其中人工感染的病鴨檢獲成蟲(chóng)192條（雌蟲(chóng)95條，雄蟲(chóng)97條），每只人工感染的病鴨檢獲成蟲(chóng)22～41條，平均32條；從自然感染的病鴨檢獲成蟲(chóng)2303條（雌蟲(chóng)1006條，雄蟲(chóng)1297條），每只病鴨檢獲成蟲(chóng)186～315條，平均230.3條。從16只病鴨檢獲的成蟲(chóng)均為活蟲(chóng)。

　　2.4　肝門(mén)靜脈及腸系膜靜脈灌注法　分離人工感染的雛鴨10只和在流行區購買(mǎi)的陽(yáng)性家鴨10只，分別檢獲成蟲(chóng)448條（雌蟲(chóng)197條，雄蟲(chóng)251條）和2554條（雌蟲(chóng)1231條，雄蟲(chóng)1323條）。每只人工感染的病鴨檢獲成蟲(chóng)22～56條，平均45條；每只購自流行區的陽(yáng)性家鴨檢獲成蟲(chóng)194條～396條，平均255條。從20只病鴨所分離的成蟲(chóng)均為活蟲(chóng)。

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